我公司根據*新的elisa新聞中得知，許多朋友們因覺得實驗的操作簡潔而忽略的細節(jié)部分與一些注意事項。相關細節(jié)我們在之前都了解過，今天在這里上海恒遠生物再一次強調，使用elisa試劑盒實驗的過程中不可忽略的三大細節(jié)！
細節(jié)一：加樣
在ELISA中除了包被外，一般需進行4－5次加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結合物的稀釋液應按規(guī)定配制。上海恒遠提醒，加樣時應將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現氣泡。
細節(jié)二：保溫
在ELISA中一般有二次抗原抗體反應，即加標本后和加結合物后，此時反應的溫度和時間應按規(guī)定的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應該是金屬的，傳熱容易。如用保溫箱，空濕盒應預先放在其中，以平衡溫度，這在室溫較低時更為重要。加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。 細節(jié)三：洗滌
洗滌在ELISA過程中不是反應聚，但卻是決定實驗成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯待塑料對蛋白質的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。在標本和結合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯一類物質即右達到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質，常作為助溶劑。根據脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號，結合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中*為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結合的作用。
洗滌如不徹底，特別在*后一次，如有酶結合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標本內的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產生干擾。
ELISA板的洗滌一般可采用方法：1、吸干孔內反應液；2、將洗滌液注滿板孔；3、放置2min，略作搖動；4、吸干孔內液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數一般為3～4次，有時甚至需洗5～6次。
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